Master Degree / Yüksek Lisans Tezleri

Permanent URI for this collectionhttps://hdl.handle.net/11147/3008

Browse

Filters

2023 - 20242

Settings

Access type: Open accessSubject: search.filters.subject.Messenger RNA

Search Results

Now showing 1 - 2 of 2
  • Master Thesis
    Investigation of Aminoethyl Methacrylate Polymers for in Vivo Delivery of Mrna
    (01. Izmir Institute of Technology, 2024) Esmer, Ayça; Zareıe, Esma Volga Bulmuş; 01. Izmir Institute of Technology
    Güvenli ve etkili gen tedavileri için viral olmayan vektörlere büyük bir ihtiyaç vardır. Özellikle mRNA (mesajcı RNA) temelli gen tedavileri için polimerik vektörlerin kullanımı çok sınırlıdır. Bu tez kapsamında, zebra balığı embriyoları kullanılarak yeni geliştirilen bir polimerik vektörün in vivo transfeksiyon etkinliğinin, bilinen lipidik ve polimerik vektörlerle karşılaştırmalı olarak ön araştırmasının yapılması amaçlanmıştır. Bu amaç doğrultusunda, blok kopolimer, poli(oligo(etilen glikol) metakrilat)-b-poli(2-(amino)etil)amino)etil metakrilat, P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)48 ile Lipofectamine 3000 ve dallanmış polietilen iminin (PEI) (25 kDa) mRNA transfeksiyon etkinliği zebra balığı embriyoları modeli üzerinde in vivo olarak incelenmiştir. Çalışılan aralıkta en iyi uygulama bölgesi ve yöntemi, mRNA dozu, türü ve gelişim aşamasını belirlemek için önce çıplak mRNA veya Lipofectamine-mRNA kompleksleri kullanılarak birçok optimizasyon deneyi gerçekleştirildi. Optimizasyon deneylerinden elde edilen sonuçlar göz önünde bulundurularak, GFP-mRNA (2000 ng) ve N/P oranı 3.6 veya 7.3 olan P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)48 ile oluşturulan polipleksler, GFP ifadesini gözlemlemek için döllenmeden 48 saat sonraki gelişim aşamasında olan zebra balığı embriyolarının perikardiyal boşluğuna enjekte edildi. Karşılaştırma için çıplak mRNA, çıplak embriyolar, Lipofektamine-mRNA kompleksi ve PEI-mRNA polipleksleri kullanıldı. Örnekler enjeksiyondan 24 saat sonra konfokal mikroskobu kullanılarak görselleştirildi ve Image J ile analiz edildi. Blok kopolimer, altın standart polimerik vektör PEI ile karşılaştırılabilir transfeksiyon etkinliği gösterdi. Bu çalışmada elde edilen ön sonuçlar, mRNA tabanlı gen tedavileri için potansiyel bir polimerik vektör olarak P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)48'in in vivo uygulamaları üzerine daha fazla araştırma yapılmasının önünü açmaktadır.
  • Master Thesis
    Development of Polymeric Carriers for Mrna Delivery
    (01. Izmir Institute of Technology, 2023) Bulmuş Zareie, Volga; Bulmuş Zareie, Esma Volga; 03.01. Department of Bioengineering; 03. Faculty of Engineering; 01. Izmir Institute of Technology
    Development of efficient delivery systems is a constraint on the delivery of messenger RNA (mRNA). In gene therapy, it is crucial that mRNA molecules are efficiently delivered into cells. The thesis study has focused on the development of a relatively new polymer, P(OEGMA)-b-P(AEAEMA) as a new mRNA delivery system. P(OEGMA)-b-P(AEAEMA) block copolymers with changing block lengths (P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)48 and P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)71) were first synthesized via RAFT polymerization. The synthesized block copolymers efficiently complexed with eGFP encoded mRNA as shown by gel electrophoresis. The hydrodynamic size of polyplexes was less than 150 nm, as determined by dynamic light scattering measurements. Zeta potential measurements showed that the surface charge of the polymer-mRNA complexes was slightly negative. The eGFP-encoding mRNA transfection ability of the copolymers was investigated via fluorescence microscopy and Image J analyses. The block copolymers showed mRNA transfection efficiency on human embryonic kidney (HEK293T) and mouse fibroblast (L929) cell lines higher than the golden standard polymer, branched PEI. P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)48 and P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)71 showed a transfection efficiency of 54 and 64% of the positive control (cells transfected with Lipofectamine-mRNA complexes), respectively, on human embryonic kidney (HEK293T) cell line. On mouse fibroblast (L929) cell line, P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)48 and P(OEGMA)42-b-P(AEAEMA)71 block copolymers showed a transfection efficiency of 61 and 56% of the positive control, respectively. The polymer complexes showed tolerable (>70%) or no cytotoxicity on the cells in the tested range. In summary, P(OEGMA)-b-P(AEAEMA) block copolymers have shown promising mRNA transfection ability on both HEK293T and L929 cell lines.