Connexin26 Mutasyonlarının Neden Olduğu Kid Sendromunda Gözlenen Epidermal Fenotiplerin Oluşmasında Nf-kb Yolağının Rolünün Araştırılması

Abstract

Connexinlerin oluşturduğu gap junctionlar ve yarım kanallar insan vücudunda deri gibi bir çok doku ve organın normal olarak faaliyetlerini devam ettirmesinde önemli görevler üstlenirler. Connexin26 (Cx26) mutasyonları hem sendromik olmayan sağırlığa hem de keratitis-ichthyosis-deafness (KID) sendromu gibi deri hastalıklarıyla bağlantılı sendromik sağırlığa neden olmaktadır. Sendromik sağırlığa neden olan mutasyonlar Cx26?nın yeni fonksiyonlar kazanmasına neden olmakta, ancak bunun epidermal hücrelerin fizyolojisini nasıl etkilediği tam olarak bilinmemektedir. Bu projede, KID sendromuna neden olan Cx26-G45E ve Cx26-D50Y mutasyonları ile Cx26-WT içeren HaCaT keratinosit hücrelerinde mutasyonların NF-?B sinyal yolağı moleküllerinin ifadelerine ve NF-?B yolak aktivitesindeki değişimlere etkileri araştırılmıştır. Ayrıca, hücre içi ve hücre dışı kalsiyum konsantrasyonlarının azaltılmasının bu mekanizmalara etkileri sırasıyla BAPTA-AM ve BAPTA kalsiyum çekici molekülleri uygulaması sonucunda incelenmiştir. Son olarak, hücrelerde NF-?B yolağının inhibisyonunun hücrelerin canlılık/çoğalmaları, hücre döngüsü, hücre ölümü ve hücrelerin farklılaşmalarına etkileri tespit edilmiştir. Bu çalışmalar sonucunda, Cx26-D50Y içeren hücrelerde RelB ve c-Rel mRNA ifadesi azalmış, buna karşılık NF-?B yolak aktivitesi artmıştır. Buna karşılık, Cx26-G45E mutasyonunda yolak moleküllerinin ifadelerinde farklılık gözlenmezken yolak aktivitesi azalmıştır. Ayrıca, p65?in Cx26-G45E hücrelerinde Cx26-WT ve Cx26-D50Y?ye kıyasla hem sitoplazmada hem de çekirdekte bulunduğu ve c-Rel proteinin her iki mutasyonda çekirdekte lokalize olduğu tespit edilmiştir. Hücre içi kalsiyumun azalmasının Cx26 overekspresyonu olan hücrelerde RelB?nin çekirdeğe geçişini artırdığı gözlenmiştir. Ayrıyeten, hücre dışı kalsiyumun Cx26-D50Y hücrelerinde p65 ve c-Rel mRNA ifadesini azalttığı tespit edilmiştir. NF-?B inhibisyonu MTT çalışmalarında hücre canlılığını/çoğalmasını azaltmış, ancak, hücre proliferasyonu, döngüsü ve apoptozunu etkilememiştir. Buna karşılık, Cx26-G45E içeren hücrelerde farklılaşma belirteci cytokeratin 10 ve involucrinin arttığı ve cytokeratin 10?daki artışın NF-?B sinyal yolağının inhibisyonu ile azaldığı gözlenmiştir. Sonuç olarak, Cx26 KID sendromu mutasyonlarının NF-?B sinyal yolağına farklı şekillerde etkilerinin olduğu ve bunun hastalarda mutasyona özgü gözlenen epidermal fenotiplerin gelişmesinde rol oynayabileceği değerlendirilmiştir.